6.3.1.3 将培养好的菌液与比浊液管置比色卡上对着光源比较，适当情况下可用无菌生理盐水或肉汤稀释菌悬液，使两者浊度一致，即菌悬液的浓度为0.5标准麦氏单位，在该浓度下质控菌株ATCC 25922的菌液浓度为1～2×108CFU。也可采用分光光度计测定并调节菌液浊度。
6.3.2 直接制备菌液法
该法较生长法简便，用接种环挑取琼脂平板上培养16～18小时的3～5个单菌落，用无菌生理盐水或M-H肉汤稀释至0.5麦氏单位。
6.3.3 将调节至0.5麦氏单位的菌液用M-H肉汤或生理盐水稀释100倍，约5X105-106CFU/ml浓度。
6.3.4 取5X105-106CFU/ml浓度的菌液0.1ml分别加入含系列抗菌药物溶液的板中， 混匀，试管中最终抗菌药物的浓度为原稀释浓度的一半。
6.4 培养
将加有菌液和抗菌药物的板，置35℃培养箱中培养16～20小时。
6.5 结果测定
取出培养后的板，观察结果，以无菌生长的最低抗菌药物溶液的浓度为最低抑菌浓度（MIC）。
6.6 结果判断
在质控菌株的最低抑菌浓度符合规定范围（附注1和2）的前提下，按判断标准（附注1和2）判断被检菌株的敏感性－敏感，中度敏感或耐药。对于只给出敏感判断标准的药物，只报告其是否敏感即可。
7．注意事项
7.1 冷冻或冻干菌株应培养两代后才可用于测定。
7.2 调整好浊度的菌液应于15分钟内稀释至工作浓度。
7.3 M-H肉汤的质量对试验结果的影响
7.3.1 M-H肉汤是常规药敏试验中的最佳培养基，含磺胺，甲氧苄啶和四环素抑制剂较少，能满足大多数快速生长的需氧菌或兼性厌氧菌的营养需求。
7.3.2 试验一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应为7.2～7.4。
7.3.3 有些生产商能直接提供已调节阳离子浓度的M-H肉汤，否则需用原子吸收光谱仪测定。
7.3.4 新鲜配制的培养基，应按规定的处方，对培养基的原材料要进行挑选，所选用的化学试剂均应为分析纯。
7.3.5 如分离的菌种不典型或试验结果前后不一致时，应对菌种进行重新鉴定或重新进行药敏测定。
8. 名词解释
8.1 敏感 （Susceptibillity， S）：表明该菌株所致感染可以用推荐的抗菌药物剂量进行治疗，除非存在禁忌症。
8.2 中介（Intermediate， I）：用抗菌药物MIC浓度治疗菌株感染，可使血液和组织中药物浓度接近通常可达到的水平，而抗生素治疗的反应率可能低于敏感株。意味着药物生理浓度部位具有临床效力（如尿液中的喹诺酮类和β－内酰胺类）或可用高于正常剂量的药物进行治疗（β－内酰胺类）。该类还包括一个缓冲区，可防止微小的，未能控制的技术因素造成的结果解释错误，特别是对那些安全范围窄的药物。
8.3 耐药（Resistance， R）：指按常规剂量使用，抗生素通常达到的全身浓度不能抑制其生长的菌株，和/或某些抗菌药物的抑菌圈直径在耐药机制范围，且临床治疗效果不可靠。
9．参考文献
9.1 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；fifteenth Informational Supplement.Clinical and Laboratory Standards Institute.
9.2 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals；Approved Standard-Second Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute.
9.3 Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically； Approved Standard-sixth Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute.
附注1 肠道杆菌药敏判定标准
| 药物 | MIC判定标准（µg/mL） | 质控菌株MIC范围（µg/mL） |
| S | I | R | ATCC25922 | ATCC35218 |
| 氨苄西林（AM） | ≤8 | 16 | ≥32 | 2-8 | |
| 阿莫西林/克拉维酸（A/C） | ≤8/4 | 16/8 | ≥32/16 | 2/1-8/4 | 4/2-16/8 |
| 头孢噻呋（CEF） | ≤2 | 4 | ≥8 | 0.25-1 | |
| 庆大霉素（GM） | ≤4 | 8 | ≥16 | 0.25-1 | |
| 大观霉素（SPT） | ≤32 | 64 | ≥128 | 8-64 | |
| 四环素（TE） | ≤4 | 8 | ≥16 | 0.5-2 | |
| 多西环素（DO） | ≤4 | 8 | ≥16 | -- | |
| 氟苯尼考（FFC） | ≤4 | 8 | ≥16 | 2-8 | |
| 磺胺异恶唑（SF） | ≤256 | - | ≥512 | 8-32 | |
| 复方新诺明（SXT） | ≤2/38 | - | ≥4/76 | ≤0.5/9.5 | |
| 恩诺沙星（ENR） | ≤0.25 | 0.5-1 | ≥2 | 0.008-0.03 | |
| 氧氟沙星（OFL） | ≤2 | 4 | ≥8 | 0.015-0.12 | |
| 多粘菌素E（PME） | ≤2** | 4 | ≥8** | 0.25-1 | |
